温州细胞实验-细胞实验外包公司-英瀚斯生物科技公司(多图)
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南京英瀚斯生物科技有限公司

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细胞实验介绍——细胞运动能力检测:

细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。

一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照

细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异诱导细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。

一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照

结果示例:






                                       图 A 细胞划痕实验图;B,C 细胞迁移和侵袭实验图







成纤维细胞分离方法

1.处死孕鼠,全身置于75%酒精里浸泡,然后在超净台中用剪刀和镊子将孕鼠皮肤剪开,用另外- -组剪刀、镊子剪开腹部肌层,露出,后用第三组剪刀和镊子将小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中,冲洗去血。

2.用两把弯镊子将胚胎外的胞膜小心去除,然后夹掉头和内脏,将其余胚胎转移到一个装有30 ml D-PBS的50 ml离心管中,轻轻颠倒两次,倒掉D-PBS,再重复此步骤一次,注意要留少许D-PBS,然后将胚胎转移到另- -装有D-PBS的平皿中,并用手术刀片将其细细切碎。

3. 用200 μ的移液反复、快速地吹打平皿中的液体,转移至15 ml离心管中,于4C 1500 rpm离心5分钟,倒掉上清,以10 ml胰酶重悬沉淀,放在37C水浴中消化30分钟,且每隔五分钟轻轻晃动,使之充分消化。

4.将上层细胞悬液倒入一个装有10 ml MEF生长培养基的50 ml离心管中,用200目的尼龙网过滤后,以1500 rpm离心5分钟收集细胞,再用30 ml MEF生长培养基洗涤两次。

5.细胞沉淀用15 ml MEF生长培养基重悬后进行细胞计数(- -般8只14天的胎鼠可获得2-3x107细胞)。

6. 3x106细胞悬浮于15 ml MEF生长培养基中,接种到200 ml培养瓶中。

7. 24小时后更换新鲜的MEF生长培养基。

8.细胞长满后,先用D-PBS冲洗,倒掉后加胰酶消化(此步时间不宜过长,作者- -般不超过五分钟),按1:5传代。

9. 细胞再次长到覆盖率80-90%左右, 将其消化后,常规冻存(冻存液要现配)。





4.  各种细胞对冻存速度的要求也不一样;上皮细胞和成纤维细胞耐受性可能大些,-2~-3℃/ 分钟合适;胚胎细胞耐受性较小,不宜太快。总之在一开始时,下降速度不能超过-10℃/ 分钟。

5.  用什么防护剂合适和用量多大,要依细胞而定,初代培养细胞用 DMSO 较好,一般细胞可用甘油;用量以较小为好。有人认为肤上皮细胞贮存在 20%-30% 甘油中很好。

6.  原则上细胞在液氮中可贮存多年,但为妥善起见,冻存一年后,应再复苏培养一次,然后再继续冻存。

7. 将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免

8. 注意自身的安全,对于来自人源性或病毒的细胞株应特别小心。操作过程中,应避免引起气溶胶的产生,小心有毒性试剂例如 DMSO,并避免尖锐物品伤人等。



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