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辽宁pcr-dna检测-英瀚斯(多图)
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南京英瀚斯生物科技有限公司

经营模式:商业服务

地址:江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301

主营:组织病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型科研外包服务

业务热线:025-58651876

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产品品牌:英瀚斯
供货总量:不限
价格说明:议定
包装说明:不限
物流说明:货运及物流
交货说明:按订单
有效期至:长期有效

1、细胞准备:细胞传到后,密度达到70%左右时进行转染;

2、细胞转染:取两个EP管,一个加入Opti-MEM、质粒和包装质粒;另一个加入Opti-MEM、lipo2000,然后将两管混匀;

3、细胞孵育:将混合液逐滴加入细胞培养皿中,混匀后孵育;

4、收集病毒:转染后48h、72h收集含慢病毒的上清;

5、滴度检测:细胞为30%-50%时加入病毒上清液,检测阳性细胞比例。













单核苷酸多态性( SNP )实验

SNP (Single Nucleotide Polymorphisn即单核苷酸多态性 ,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP ,无论是比较于度多态性(RFLP)分析还是微标记(STR) ,都要广泛得多。

实验方法原理:

SNP (Single Nucleotide Polymorphisn即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP ,无论是比较于限制性段长度多态性(RFLP)分析还是微标记(STR) ,都要广泛得多。SNP是我们考察遗传变异的单位,据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。-般认为,相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。 于是,我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型( haplotype b大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率),它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。-个染色体区域可以有很多SNP位点,但是我们一-旦掌握了这个区域的单体型,就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型,获取大部分的遗传多态模式。





RNA提取

1.弃去培养液,用PBS清洗两次1-2。

2.弃去PBS,用1000u1吸干净残余PBS。

3.加1ml TRIZOL研磨B 41。

4. 1.5mIEP管标号与每孔相对应备用。

5.研磨好的溶液转移至对应的 EP管中国。

6.往每个EP管中加入250ul,剧烈震荡30s, 冰上静置12min[问l。

7. 所有样品4C离心,转速: 13500转1分钟,时间: 15min.

8. 再次标记一批同样编号EP管。

9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的EP管中,再加入400ul异充

分混匀。4C冰箱35min。

10. 4C离心,转速: 13500转1分钟,时间: 10min.

11.弃去.上清液,加1m175%乙醇,轻摇7]。

12. 4C离心,10600转/分钟,时间: 5min.

13. 弃上清液滤纸吸干。

14. 加DEPC水10ul溶解,-80C保存。进行逆转录前测浓度。

组织RNA提取

1、剪米粒大小组织块放入EP管中标号。

2、EP管中加300ul trizol浸泡30分钟或更久。

3、用研磨棒研磨,以肉眼很难看到组织为宜。

4、加700u1 trizol静 置5分钟。





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