细胞实验外包选哪家-青海细胞实验-英瀚斯
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南京英瀚斯生物科技有限公司

经营模式:商业服务

地址:江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301

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细胞实验部分设备图片





公司目前拥有多项产品及技术,其中发明两项,软件著作权八项,实用新型三项,商标两件。公司先后获得“江苏省民营科技企业”、“江苏省科技型中小企业”、“江苏省专精特新中小企业”等荣誉资质,连续多年被评为“东南大学国家大学科技园企业”。2019年公司成为江苏省生物技术协会第七届理事会的特邀理事,成立了“李冬冬创新工作室”,并获得了南京市“工人先锋号”的荣誉称号。







软琼脂培养克l隆形成试验基本步骤:

(1)取对数生长期细胞,用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打,使之成为单细胞,作活l细胞计数,用含20%胎牛血l清的DMEM培养液调整细胞密度至1x106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。

(2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液,高压灭菌后,维持在40日中不会凝固。

(3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2xDMEM培养基(含有2x和20%的小牛血l清)混合后,取3mL混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加7~ 10mL),冷却凝固,可作底层琼脂置CO2温箱中备用。

(4)按1:1比例让0.7%的琼脂糖和2xDMEM培养基在无菌试管中相混以后,再向管中加入0.2mL的细胞悬液,充分混匀,注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中,逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后,置入37回5%CO2温箱中培养10~14天。

(5)把平皿放置在倒置显微镜下,观察细胞数。计算形成率。软琼脂培养法常用检测肿l瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时,琼脂温度不宜超过40日。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个,一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖,不适用于软琼脂克l隆形成试验。

软琼脂集落形成率实验(软琼脂克l隆)

将1.2%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合制备0.6%的底层琼脂,6孔板中每个孔1.4ml温室凝固,取对数期细胞,胰酶消化后吹散成单个细胞悬液,计数,并调细胞浓度为10000个/ml,将0.6%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合,制备0.3%的上层琼脂,每孔加1ml 上层琼脂和100ul单细胞悬液(约1000ell/wel), 混匀,室温凝固。置于37目,5%CO2的细胞培养箱中培养2-3周,计数含50个细胞以上得克l隆,计算细胞集落形成率,Spotll 采集图像。







细胞冻存有哪些注意事项?


细胞培养的传代及日常维持过程中,在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费,而且细胞一旦离开开始原代培养,它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞储存在液氮中,温度达-196℃,理论上储存时间是的。


细胞冻存的步骤:

配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛的冻存培养液;

取对数生长期的细胞,去除旧培养液,用 PBS 清洗。

去除 PBS,加入适量胰蛋白酶 (覆盖培养皿表面) 把单层生长的细胞消化下来;

离心 1000rpm,5min;

去除胰蛋白酶,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的终密度为 5×106/ml~1×107/ml;

将细胞分装入冻存管中,每管 1~1.5 ml;

在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;

冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱 2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。






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