供应信息
西藏pcr-英瀚斯(推荐商家)-PCR实验室
西藏pcr-英瀚斯(推荐商家)-PCR实验室

南京英瀚斯生物科技有限公司

经营模式:商业服务

地址:江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301

主营:组织病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型科研外包服务

业务热线:025-58651876

点击这里给我发消息

产品详情 联系方式
产品品牌:英瀚斯
供货总量:不限
价格说明:议定
包装说明:不限
物流说明:货运及物流
交货说明:按订单
有效期至:长期有效

DNA测序检测

1. PCR测序反应

(1)取0.2ml的PCR管,用记号笔编号,将管插在颗粒冰中,按下表加试剂:

所加试剂测定模板管标准对照管

BigDye Mix

1μl

1μl

待测的质粒DNA

1μ 1

pGEM-3Zf (+)双链DNA

-1μ1

待测DNA的正向引物

1μ 1

M13(-21)引物- 1μ 1

灭菌去离子水

2μ 1

2μ 1

总反应体积5μ 1,不加轻矿物油或石蜡油,盖紧PCR管,用手指弹管混匀,稍离心。

(2)将PCR管置于9600或2400型PCR仪.上进行扩增。98C变性2min后进行PCR循环,

PCR循环参数为96C 10s, 50C 5s, 60°C4min, 25 个循环,扩增结束后设置4C保温。

2.乙醇法纯化PCR产物

(1) 将混合物离心,将扩增产物转移到1.5ml EP管中。

(2)加入25μ 1/乙醇混合液,充分振荡,置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于

4C离心30 min,小心弃上清。

(3)加70%(V/V)的乙醇50μ 1 洗涤沉淀2次。12 000r/min 于4C离心5min,小心弃上清和

管壁的液珠,真空干燥沉淀10~ 15min。

3.电泳前测序PCR产物的处理。

(1)加入12μ 1的TSR于离心管中,剧烈振荡,让其充分溶解DNA沉淀,稍离心。

(2)将溶液转移至盖体分离的0.2ml PCR管中,稍离心。

(3)在PCR仪上进行热变性(95C 2min),冰中骤冷,待_上机。

4..上机操作按仪器操作说明书安装毛细管,进行毛细管位置的校正,人工手动灌胶和建立

运行的测序顺序文件。

5.仪器将自动进行序列分析,并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知,可通过

序列比较以星号标出差异碱基处,提高工作效率。

6.测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。










线粒体测序

线粒体是真核生物的重要细胞器,是生物体的能量工厂,参与能量代谢、信号转导、细胞凋亡等许多生命活动,对生物的生理活动起着至关重要的作用。大部分线粒体基因由于其母系遗传特性以及进化速率较快等特点,被广泛地用于种群遗传学、进化生物学、谱系地理学和系统发育学、疾病诊断等学科领域。线粒体全基因组在生物进化的研究中具有的优势。由于线粒体有着与真核生物长期共生的进化历史,因此其基因组包含了反映物种进化的关键信息,同时,相对于核基因组,线粒体基因组小,容易对大量物种进行横向的比较分析,有利于生物进化的研究,因而受到进化生物学家的钟爱。线粒体的组成可以从两个层面上反映物种及群体的遗传和进化,即核酸序列组成和基因组的结构特征,两者的特征具有不同的进化机制和进化速度,在进化生物学研究中可以很好的互补。






9.如何计算引物的Tm值?

答:引物设计软件都可以给出Tm,与引物长度、碱基组成、引物使用缓冲的离子强度有关。

长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:

Tm =            4℃   (G + C)+ 2℃   (A + T)

对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:

Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) - 600/size

公式中,Size = 引物长度。

Tm的定义:Tm = Temperature at which 50% of a given oligonucleotide is hybridized to its complementary strand. In the absence of destabilizing agents, like formamide or urea, Tm will depend on 3 major parameters: The sequence: a GC-rich sequence has a higher melting temperature. The strand concentration: high oligonucleotide concentrati favor hybrid formation, which results in a higher melting temperature. The salt concentration: high ionic strength results in a higher Tm as cati stabilize the DNA duplexes.




戴经理先生 点击这里给我发消息

手机:13770566402

南京英瀚斯生物科技有限公司

地址:江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301
电话:025-58651876
传真:025-58651876