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南京英瀚斯生物科技有限公司

经营模式:商业服务

地址:江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301

主营:组织病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型科研外包服务

业务热线:025-58651876

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产品品牌:英瀚斯
供货总量:不限
价格说明:议定
包装说明:不限
物流说明:货运及物流
交货说明:按订单
有效期至:长期有效

1、细胞准备:细胞传到后,密度达到70%左右时进行转染;

2、细胞转染:取两个EP管,一个加入Opti-MEM、质粒和包装质粒;另一个加入Opti-MEM、lipo2000,然后将两管混匀;

3、细胞孵育:将混合液逐滴加入细胞培养皿中,混匀后孵育;

4、收集病毒:转染后48h、72h收集含慢病毒的上清;

5、滴度检测:细胞为30%-50%时加入病毒上清液,检测阳性细胞比例。













microRNA芯片:

RNA干扰(RNA Interference, RNAi)现象是一种进化上保守的抵御或外来病毒qin犯的防御机制。将含有靶基因mRNA同源互补序列的RNA(Double strand RNA, dsRNA)导入细胞后,能够特异地识别该mRNA,引起mRNA的降解,从而导致相应的功能缺失。RNAi提供了一种经济、快捷、gao效的抑制特异基因表达的技术手段,该技术已被广泛用于研究基因功能和chuan染性疾病及恶xingzhong瘤基因zhi疗领域。目前常用的RNA干扰手段为miRNA、 shRNA和siRNA等。

MiRNA是一类可以通过RNAi机制调节基因表达的内源性小RNA,人工miRNA与shRNA的设计原理基本相同,由于miRNA具有内源性,因此其更易产生有效的基因沉默。

技术流程:

dsRNA或pre-miRNA被导入细胞后,能够被一种特异的核酸内切酶(Dicer)识别并切割成为小片段,这些片段在RNA解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-Induced Silencing Complex,RISC),RISC与mRNA同源区进行特异性结合,若miRNA与mRNA的结合位点配对,则切割mRNA;若miRNA与mRNA的结合位点不配对,则抑制mRNA的翻译。








7.如何检测引物的纯度?

答:实验室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的16%的聚酰胺凝胶进行电泳。取0.2-0.5OD的引物,用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和,上样前加热变性(95℃,2mins)。加入尿素的目的一是变性,二是增加样品比重,容易加样。600V电压进行电泳,一定时间后(约2-3小时),剥胶,用荧光TLC板在紫外灯下检测带型,在主带之下没有杂带,说明纯度是好的。如果条件许可,也可以用EB 染色或银染方式染色。

而有的厂家提供Maldi-TOF质谱QC质量控制,从而保障了合成的准确率:

Bioneer使用多重Maldi-TOF质谱仪进行全自动装载及监测。 每份样品的质谱分析数据将自动插入到寡核苷酸的信息单中。Bioneer是世界上仅有的几个对生产的每份核苷酸 (单个寡核苷酸和高通量和成) 都用MALDI-TOF质谱仪检测进行核苷酸QC检测的厂商,而且免费提供质谱数据。

8.如何计算引物的浓度?

答:引物保存在高浓度的状况下比较稳定。引物一般配制成10-50pmol/ul。 一般情况下,建议将引物的浓度配制成50pmol/ul,加水的体积(微升)按下列方式计算:V (微升)= OD数*(乘)33 *(乘)*(乘)20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以从合成报告单上获得。如果需要配制成其他浓度,按上述公式换算。

注意:1 OD260= 33 ug/ml.




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