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宜宾pcr-dna检测-南京英瀚斯生物科技
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南京英瀚斯生物科技有限公司

经营模式:商业服务

地址:江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301

主营:组织病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型科研外包服务

业务热线:025-58651876

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产品品牌:英瀚斯
供货总量:不限
价格说明:议定
包装说明:不限
物流说明:货运及物流
交货说明:按订单
有效期至:长期有效

蛋白质双向电泳实验流程

1.三氯yi酸-bing酮沉淀法提取蛋白

2.双向电泳分离待测样品

(1)一相等电聚焦前处理按照所用仪器的厂商提供操作手册进行。蛋白质上样浓度不要超过10mg/mL,否则会造成蛋白质的聚集或沉淀。

(2)等电聚焦完毕后(约需24hr),若不立即进行第二相电泳,胶条可夹在两层塑料薄膜中于-70℃保存数月。

(3)等电聚焦好的胶条按厂商提供的操作手册平衡两次。平衡完毕后,于电泳仪上用12.5%SDS-PAGE凝胶进行电泳分离。仪器设置为2.5W/胶 45min,15W/胶 5-8hr,20℃。

3.银染法对凝胶进行染色

(1)固定(2)清洗(3)增敏(4)清洗(5)染色(6)清洗(7)显影(8)定影(9)水洗

3.凝胶扫描及图像分析

(1)图像扫描:凝胶染色后采用Image scanner以300dpi,16-bit模式(65536灰阶)进行扫描。

(2)图像分析:扫描完毕后,凝胶继续置于1%yi酸中于4℃保存。扫描后的图像用ImageMaster 2D Platinum software软件进行分析。分析按照软件厂商提供的说明书进行。以zui小点面积30,平滑度2为主要参数zui大限度检测蛋白质点。以目标蛋白质3个重复具有相同趋势,目标蛋白质相邻位点的相对一致性,至少2个重复有2倍以上差异作为判定差异表达蛋白质的标准。












Southern杂交

实验原理

      Southern印迹杂交(Southern blot)是1975年由英国人southern创建,是研究DNA图谱的基本技术。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNAl片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNAl片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放l射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。







活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物(compound mixture),浓度为50mg/ml。

一、注意事项

1、探针装载后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。

2、探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否良好。

3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。

4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



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