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实验病理制片技术介绍
实验病理制片技术介绍

实验病理制片技术

一、 固定
1 固定的意义:
固定的目的是使蛋白质等成分凝固,及时固定可使组织结构或细胞形态更接近生活状态。同时,固定可使组织硬化成形,便于后续的包埋、切片以及染色。因此,固定是实验病理学制片技术中非常重要的环节。
2 固定剂选择
固定剂种类较多,但目前没有通用于能使所有被固定的细胞、组织成分都达到最佳固定效果的固定剂。目前应用范围最广的是10%中性甲醛溶液和4%多聚甲醛。
3 固定方法
1 浸泡固定
取出待检组织浸泡于固定液中,固定液必须足量,一般是组织块总体积的50倍,固定时间一般为48-72h,保证固定液充分渗入组织。
2 灌注固定
用于脑、心脏,肝、肾、肺组织标本的固定,通过体内血液循环系统对实验动物全是各脏器的固定。
二、 取材
由于取出的新鲜组织较柔软,不易直接切割成实验所需形状。组织经过固定,因固定剂的渗入,使蛋白质变性凝固,形成一定的硬度而容易修整切取,此过程称为取材。
 
实验所取的器官组织不可能全用于制片,要根据实验目的,选择性取材。对局灶性病变取材,要包含病变部位以及邻近的正常组织区域。总之,取材部位要使实验目的能在制片标本上得到完全反映。

 

 

 

三、 脱水
1 脱水目的
组织经固定后仍含有大量水分,以石蜡为包埋剂时,由于水与石蜡不能混合,应在浸蜡包埋前使用脱水剂逐步将组织中水分置换出来,这一过程称为脱水。
2 脱水步骤
低浓度至高浓度乙醇依次梯度脱水,再经历二甲苯置换,最终浸蜡完成脱水

 

四、 包埋
浸蜡后的组织与熔化的石蜡在模具中冷却固定为一定形状的过程称为包埋。

 

五、 切片
组织经石蜡包埋后,再用切片机制成切片的过程称为切片。
切片是制片过程中很重要的环节,优质切片要求组织切片薄、平整、边缘齐,无刀痕、褶皱、龟裂等。切片厚度一般3-5μm,脑组织和脂肪组织稍厚,以6-8μm为宜。

 

六、 染色
染色是染色剂和切片组织细胞相结合的过程,目的是使组织标本各部分在光学显微镜下能清晰的显示出来,观察各组织结构和病变
分类:
常规染色:HE染色
特殊染色:油红O染色、天狼星红染色、masson染色
免疫组化染色